La PCR : rappels et mise à niveau

Comment visualiser le résultat de l'amplification d'ADN ?

Mise en évidence d'un marqueur moléculaire révélé par PCR

Le produit d'une réaction de PCR est un fragment de taille déterminée.

La taille du fragment dépend de la distance séparant les amorces utilisées pour réaliser l'amplification.

Pour visualiser le résultat d'une expérience de PCR, il suffit donc de faire migrer le mélange réactionnel sur un gel d'agarose et de rechercher la présence d'un fragment correspondant à la taille attendue.

Remarque

Dans cet exemple, l'ADN génomique de quatre accessions de l'espèce végétale Arabidopsis thaliana nommées Ler, Col, Ws et Nok2 ainsi que d'hybrides F1 entre certaines de ces accessions a été soumis à amplification par PCR pour le marqueur nga151.

Les bandes blanches visibles sur la photo correspondent à des fragments d'ADN, et donc aux fragments d'ADN amplifiés par PCR dans les 7 pistes du milieu de la photo.

L'ADN a été séparé selon sa taille par migration sur un gel d'agarose à 4% (électrophorèse[1]).

Par comparaison aux échelles de poids moléculaires présentes aux deux extrémités du gel (pistes L.1kb), on voit que les fragments amplifiés présentent des tailles comprises entre 75 pb et 200 pb.

Les traces visibles dans le bas du gel (pour des tailles inférieures à 75 pb) sont vraisemblablement des dimères d'amorces. Les fragments de taille supérieure à 200 pb sont vraisemblablement des artéfacts ou des multimères de produits d'amplification.

  1. Electrophorèse

    L'électrophorèse est – avec la chromatographie – la principale des techniques utilisées en biologie pour la séparation et la caractérisation des molécules.

    Elle a quelques applications en chimie, mais est principalement utilisée en biochimie ou biologie moléculaire pour la séparation des protéines ou des acides nucléiques.

    Dans un milieu donné, la séparation des particules se fait en fonction de leur charge électrique et pour des charges identiques, en fonction de leur taille.

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